兔溶菌酶檢測試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中牛孕酮(P)水平。用純化的牛孕酮(P)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入孕酮(P)，再與HRP標(biāo)記的孕酮(P)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的孕酮(P)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中牛孕酮(P)濃度。

　　兔溶菌酶檢測試劑盒實驗操作小竅門：

　　1、加酶試劑后用吸水紙在酶標(biāo)板表面輕拭吸干。

　　2、合理安排檢測量，以免反應(yīng)板過多造成洗板等待時間長。

　　3、吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

　　4、要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。

　　5、樣品稀釋液應(yīng)用加液器加注，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

　　6、為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。

　　7、未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請于2-8℃保存。辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的辣根過氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液。

　　8、ELISA試劑盒實驗中，加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。

　　9、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5、0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

　　10、人ELISA試劑盒洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

　　11、每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。

　　12、手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。

　　13、對樣本的結(jié)果有疑問時需要使用其他檢測方法進(jìn)行驗證。

　　14、沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

　　15、在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

　　16、吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，人ELISA試劑盒吸取的量不夠準(zhǔn)確。

　　17、吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。