酶聯免疫吸附測定法

1971年瑞典學者Engvall和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即酶聯免疫吸附測定法 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學領域中的前沿課題 ，它是一種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發展起來的一種新型的免疫測定技術 。

中文名

酶聯免疫吸附測定法

外文名

Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay , ELISA

別名

ELISA法

發現者

Van Weerman

原理

抗體與酶復合物結合顯色

1.標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第一、第二孔中分別加標

準品100µl，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50µl，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取100µl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50µl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50µl棄掉，再各取50µl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50µl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50µl，混勻后從第七、第八孔中分別取50µl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50µl，混勻后從第九第十孔中各取50µl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50µl，濃度分別為12ng/ml，8ng/ml，4ng/ml，2ng/ml，1ng/ml）。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此

重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止

液后15分鐘以內進行。